lunes, 10 de octubre de 2016

Grupo 4

Prácticas de Laboratorio


Bioquímica




Grupo conformado por:
Daira Peña Rodriguez _ 1022946079
Lidia Nelly Peña Garnica_35421401
Erika Del Pilar Marca_52809058
Nicol Natali Villamil Bernal_67040307

Docente de práctica: Gustavo Jaimes

Universidad: UNAD



Lograr la práctica de laboratorio es consolidar el aprendizaje teórico que se obtiene de los principios de los organismos bioquímicos como es los que se realizaron en la presente práctica con los aminoácidos, proteínas, carbohidratos, utilizando medios reactivos como el Biuret, sudan III, sulfato cúprico, citrato sódico, que nos permiten afianzar, conocer, observar, el momento exacto en el que se realiza la prueba la separación de partículas y el cambio de colores y reacciones que se obtienen utilizando los ya mencionados medios reactivos.





PROPIEDADES BIOQUÍMICAS DE LOS AMINOÁCIDOS



Practica No 1: Procedimiento a realizar para la reacción de ninhidrina

El siguiente estudio de reacción fue realizado con Glicina y Soya a las cuales se les mezclo de la siguiente manera:


Se registran los siguientes datos:

La práctica realizada con Glicina después del procedimiento arroja como resultado de muestra que en el primer minuto de ebullición la muestra toma color violeta oscuro dando a entender con esta reacción que la Glicina es contenedora alta de aminoácidos.

la práctica realizada con Soya después del procedimiento arroja como resultado de muestra que tardó más de siete minutos en generar color morado con lo cual podemos entender que la Soya contiene una cantidad inferior respecto de la Glicina de aminoácidos.

Imágenes de resultados Práctica no. 1







Practica No 2: Procedimiento a realizar para la reacción de Reacción de Biuret.

El siguiente estudio de reacción fue realizado con Glicina y Soya a las cuales se les mezclo de la siguiente manera:


Se registran los siguientes datos:

La práctica realizada con Glicina después del procedimiento arroja como resultado de muestra que no genera ningún tipo de cambio en su coloración, esta respuesta se debe a la presencia del enlace peptidico CO-NH el cual se destruye al liberarse los aminoácidos. 

la práctica realizada con Soya después del procedimiento arroja como resultado de muestra que tardó solo un minuto para generar como respuesta un cambio en su coloración, mostrándose rosado tenue entendiendo así una respuesta positiva al enlace peptidico.

Imágenes de resultados Práctica no. 2





Practica No 3: Procedimiento a realizar para la reacción de millón.

El siguiente estudio de reacción fue realizado con Glicina y Soya a las cuales se les mezclo de la siguiente manera:



Se registran los siguientes datos:

La práctica realizada con Glicina después del procedimiento arroja como resultado de muestra que en el transcurso de los diez minutos no genero ningún tipo de reacción, manteniendo su color transparente.

la práctica realizada con Soya después del procedimiento arroja como resultado de muestra que tardó tan solo dos minutos para realizar una separación del contenido en la parte superior un color blanco - transparente y en el fondo color anaranjado - café (anillo fenolico) con partículas más consistentes ya que tuvo un grado de coagulación en la mezcla, arrojando como positivo para la reacción a la mezcla.

Imágenes de resultados Práctica no. 3




Practica No 4: Reacción De Aminoácidos Azufrados, Grupos SH

El siguiente estudio de reacción fue realizado con Albumina de Huevo a la cual se le mezclo de la siguiente manera:


Se registran los siguientes datos:

La práctica realizada con Albumina de Huevo después del procedimiento arroja como resultado de muestra que al realizar la mezcla con los reactivos de inmediato se obtiene la primera reacción la cual consiste en generar efecto de efervescencia, al siguiente paso que consiste en calentarlo hasta ebullición muestra en su primer minuto de calentamiento el proceso de oxidación mostrándose de color amarillo y al finalizar el proceso de calentamiento es de color completamente café oscuro evidenciando la formación de sulfuro de plomo. La albumina de huevo como resultado es positivo a la reacción de aminoácidos azufrados.

Imágenes de resultados Práctica no. 4









Practica No. 5 Prueba de Benedict (detecta la presencia de azúcares reductores)

El siguiente estudio de reacción fue realizado con Lactosa, Glucosa y sacarosa a los cuales se les mezclo de la siguiente manera:


Se registran los siguientes datos:

En la práctica de laboratorio se observa en la prueba de Benedict la sacarosa toma un color azul, la lactosa  un color naranja al minuto  después de 10 minutos la sacarosa empieza a reaccionar  a color verdoso.

Los colorantes para las grasas son más solubles en las propias grasas que en el medio en el que van disueltos, así al bañar la grasa con la solución del colorante este tiende  a disolverse en la grasa que se va cargando al colorante por regla general estos colorantes siempre van en solución alcohólica o bien en una mezcla de alcohol cetona o alcohol agua.


Imágenes de resultados Práctica no. 5





Practica No. 6:  Reacción de Fehling (detecta la presencia de azúcares reductores)


El siguiente estudio de reacción fue realizado con Lactosa, Glucosa y sacarosa a los cuales se les mezclo de la siguiente manera:



Se registran los siguientes datos:

Los tres aminoácidos sacarosa, fluctuosa y lactosa toman su colación empezando por la tonalidad azul, morado por último ,al pasar al fuego la lactosa se torna naranjado antes que la sacarosa y la glucosa  se observa un  punto de condensación en la parte superior  del tubo en su mayor ebullición   y la lactosa toma un color café oscuro, al transcurrir los diez minutos se retiran del calor y enseguida se pierde la condensación y pasan a estado líquido sin perder las tonalidad  adquiridas por cada uno en el inicio.

Imágenes de resultados Práctica no. 6








Practica No. 7: REACCION DE MOLISCH

El siguiente estudio de reacción fue realizado con Lactosa, Glucosa y sacarosa a los cuales se les mezclo de la siguiente manera:





Se registran los siguientes datos: 

Al adicionar las dos gotas de Molish se observa un color verde oliva brillante y se forma un anillo al rededor del tubo se observa ebullición de moléculas de agua hacia la profundidad del tubo esto nos indica la reacción del ácido con el agua, en la sacarosa se observa un anillo blanco , luego uno de tonalidad morada y al final el color verde.

Imágenes de resultados Práctica no. 7










Practica No. 8: PRUEBA DE TOLLENS

Esta prueba es análoga a la de Selivanoff, pero para el reconocimiento de galactosa y sus derivados. La galactosa, algunas pentosas y el ácido glucuronico dan un color rojo con el HCl y floro glucina. La glucosa da también un color rojo con la Floro glucina, pero muy opaco, en contraste con el color rojo transparente de la galactosa


R/ Es un procedimiento de laboratorio para distinguir un aldehído de una cetona se mezcla un agente oxidante suave con un aldehído o una cetona desconocida, si el compuesto se oxida es un aldehído  si no ocurre la reacción es una cetona.
http://medicina.usac.edu.gt/quimica/Carbonilo/Propiedades_Qu_micas.htm






         Practica No. 9: 1.      REACCION CON EL SUDAN III

El Sudan III es un colorante que se utiliza para detectar específicamente las grasas, porque es
Insoluble en agua y en cambio es soluble en las grasas. Al ser de color rojo, cuando se
Disuelve tiñe las grasas de color rojo anaranjado.
R/ El sudan III es un colorante que se utiliza para detectar específicamente la  grasas la ser de color rojo, cuando se tiñe las grasas de color rojo anaranjado
http://www.mclibre.org/otros/daniel_tomas/laboratorio/sudanIII/sudan3.html






Laboratorio Presencial

Laboratorio Bioquímica


Estudiantes:
Jessica Acevedo
Julieth Ayala
Jessica Roció Espinoza Duque

Sandra Milena Triviño

PROPIEDADES BIOQUÍMICAS DE LOS AMINOÁCIDOS


6.2 REACCIÓN CON LA NINHIDRINA
TUBO
CANTIDAD
REACTIVO
PROCEDIMIENTO
1
Glicina
Ninhidrina


·         Se toma 1.5 ml de cada mezcla
·         Se adiciono 2.5 ml de ninhidrina a cada mezcla.
·         Se colocaron los tubos en baño María por 10 minutos.
2
Leche de Soya
ninhidrina

Conclusiones:
Reacción: endotérmica
La reacción de Ninhidrina, (hidrato de tricehidrindeno) un agente oxidante poderoso, se presenta cambios en cuanto a la reacción con los aminoácidos, como son a un PH 4 - 8, donde este compuesto puede llegar  a dar calor purpura en la muestra de laboratorio obtenida. Dicha reacción se verifica con las llamadas aminas primarias y la participación del amoniaco donde no se evidencia el desprendimiento del CO2. Este cambio positivo es muy sensitivo y es una muestra apropiada para revisar  la  detección de los aminoácidos, por nombrar algunos, los aminoácidos que contienen el núcleo aromático, su reacción es de color amarillo, cuando se presenta alta temperatura con el ácido nítrico, allí las sales de estos se tornan de color naranja

Porque el cambio de color la muestra de Glicina?
El grupo alfa – amino de los aminoácidos constituyen complejos coloreados con la Ninhidrina: Un color violeta lo cual presentan el caso de los aminoácidos en su grupo primario.

Porque la soya se demoró más?
El tiempo en identificar los aminoácidos es un proceso más lento, pero es una muestra positiva para aminoácidos y las proteínas que hagan parte del grupo como se conoce el NH2 – libre entre otros que pueden llegar a generar estos cambios.

 6.3 REACCIÓN DE BIURET
TUBO
CANTIDAD
REACTIVO
PROCEDIMIENTO
1
Glicina
Hidróxido de sodio  +  Biuret


·         Se toma 1.5 ml de cada mezcla
·         Se adiciono hidróxido de Sodio 1 ml.
·         Se adiciona 3 gotas de Biuret a cada tubo.
2
Leche de Soya
hidróxido de sodio  +  Biuret

Conclusiones:

Las muestras se muestran de forma positiva, ya que se evidencia presencia de proteínas, en el momento que se torna color violeta es por la participación anteriormente dicha, y en cuanto al color rosa este realiza reacción por las cadenas de los poli péptidos no tan largos en sus enlaces. Las proteínas en forma coagulada se pueden llegar a reaccionar con la sustancia del Biuret, este reactivo es aquel que detecta las presencias de proteínas, péptidos menores y entre otros enlaces peptídicos sobre una núcleo que cuya estructura es desconocida. En cuanto al color violeta de la muestra, allí se observa las proteínas como se pueden llegar a nombrar la grenetina, entre otros esta es una reacción de manera positiva.
Se evidencia reacción del Biuret sobre un aminoácido como lo es la Glicina?
En una observación que se le realiza a un aminoácido, la reacción debería en ese momento es negativa, pero teniendo en cuenta que no presentan las conexiones de los péptidos, con la intervención de un solo aminoácido, esta construcción de los aminoácidos son dobles por cada muestra combinada.

6.5 REACCION DE MILLON
TUBO
CANTIDAD
REACTIVO
PROCEDIMIENTO
1
Glicina
Millon  + Sulfato Cúprico 


·         Se toma 1.5 ml de cada mezcla
·         Se adiciona 15 gotas de Reactivo Millon.
·         Se adiciona 3 gotas de sulfato cúprico 1% a cada tubo.
·         Se colocan los tubos a baño María por 10 minutos.
2
Leche de Soya
Millon   +  Sulfato Cúprico


Conclusiones:

·         Reacción: Endotérmica
·  Las proteínas están constituidas por aminoácidos, por los cuales los métodos se basan en el reconocimiento de los aminoácidos.
·         La Glicina no reacciono ya que no contiene moléculas de proteínas
·         En la leche de Soya se obtuve reacción ya que esta posee proteínas.




 BIOQUÍMICAS DE LAS PROTEÍNAS

7.2 REACCIÓN DE BIURET
TUBO
CANTIDAD
REACTIVO
PROCEDIMIENTO
1
Albumina
hidróxido de sodio  +  Biuret

·         Se toma 3 ml de la mezcla de albumina.
·         Se adiciona 4 gotas de hidróxido de Sodio.
·         Se adiciono 4 gotas de Biuret.


Conclusiones:
Permite determinar la presencia de enlaces peptídicos en una muestra debido a la formación de un compuesto de coordinación de color violeta.El método de Biuret  en la determinación de proteínas procede del compuesto coloreado formado por la condensación de dos moléculas de urea con eliminación de amoniaco. En este caso el Sulfato Cúprico (CuSO4) se añade a una solución de proteína que forma un complejo entre el ion cúprico y los enlaces peptídicos con la aparición de una  coloración violeta-purpura, lo que se debe a que el cobre tiene la propiedad formar dichos iones. El color violeta resulta cuando los iones cúpricos en medio alcalino se compleja con los electrones no saturados de los átomos de nitrógeno y oxigeno de los enlaces de todas las proteínas. La cantidad de color ese proporcional a la concentración de proteínas y es medida espectrofotométricamente a 550mm (Wharton 1972).

7.3 REACCIÓN DE AMINOÁCIDOS AZUFRADOS

TUBO
CANTIDAD
REACTIVO
PROCEDIMIENTO
1
Albumina
Hidróxido de Sodio  +  Acetato de Plomo
·         Se toma 3 ml de la mezcla de albumina.
·         Se adiciona 20 % de hidróxido de sodio.
·         Se adiciona 10 gotas de Acetato de Plomo.
·         Se coloca en baño María por 10 minutos.


Conclusiones:

Reacción: endotérmica 
Se forma un precipitado de color negruzco lo que nos indica que se ha formado sulfuro de plomo, utilizándose el azufre de los aminoácidos, lo que nos sirve para identificar proteínas que tienen en su composición aminoácidos con azufre.
De esta manera se pudo comprobar que la albúmina contiene aminoácidos azufrados (cisteína o metionina). 

IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS


8.2 PRUEBA DE BENEDICT
TUBO
CANTIDAD
REACTIVO
PROCEDIMIENTO
1
Glucosa

Benedict

·         Se toma 3 ml de cada mezcla.
·         Se adiciona 2 ml de Benedict a cada tubo.
Se colocan a baño María por 10 minutos
2
Lactosa
Benedict
3
Sacarosa
Benedict


Conclusiones:

Reacción: Endotérmica
La solución de Benedict es un líquido de color azul claro en su estado puro, pero cuando se agrega a la glucosa y se calienta, se vuelve marrón anaranjado. La solución de Benedict también puede detectar la presencia de otros azúcares de estructura similar. El uso más común de la solución de Benedict es en la detección de glucosa en la orina para diagnósticos de diabetes. Los diabéticos excretan glucosa en su orina porque sus células son incapaces de absorberla apropiadamente. Luego de un diagnóstico positivo, son necesarias pruebas adicionales para medir la cantidad de glucosa excretada.Esta reacción identifica azucares reductores (aquellos que tienen su OH anomerico libre), como la lactosa, la glucosa, la maltosa y celobiosa. En soluciones alcalinas, puede reducir la composición  Cu2+ que tiene color azul a Cu+ que precipita la solución alcalina como Cu2O de color rojo-naranja.  El fundamento de esta reacción radica en que en un medio alcalino, el ion cúprico es capaz de reducirse por efecto del grupo. Por lo tanto este nuevo ion  se observa como un precipitado rojo ladrillo correspondiente al oxido cuproso.

8.3 REACCIÓN DE FEHLING

TUBO
CANTIDAD
REACTIVO
PROCEDIMIENTO
1
Glucosa

Fehling A
Fehling B



·         Se toma 3 ml de cada mezcla.
·         Se adiciona 1 ml de fehling A.
·         Se adiciona 1 ml de fehling B.
·         Se colocan a baño maría por 10 minutos.

2
Lactosa
Fehling A
Fehling B

3
Sacarosa
Fehling A
Fehling B


Conclusiones:

Reacción: Endotérmica
El reactivo de Fehling, es una solución descubierta por el químico alemán Hermann von Fehling y que se utiliza como reactivo para la determinación de azucares reductores. Este reactivo está formado por dos soluciones llamadas A y B. La primera es una solución de sulfato cúprico; la segunda el hidróxido de sodio y potasio (sal de seignette). Cuando se mezclan cantidades iguales de ambas soluciones, aparece un color azul intenso por la formación de un complejo formado entre el ion cúprico y el tartrato. Agregando un aldehído y calentando suavemente, el color azul desaparece y aparece un precipitado rojo oxido cuproso. 


8.4 REACCIÓN DE MOLISCH
TUBO
CANTIDAD
REACTIVO
PROCEDIMIENTO
1
Glucosa
Molisch  + Ácido Sulfúrico



·         Se toma 3 ml de cada mezcla.
·         Se adiciona 2 gotas de Molisch en cada tuvo.
·         Se adiciona 1 ml de Ácido sulfúrico en cada tuvo.
2
Lactosa
Molisch  + Ácido Sulfúrico

3
Sacarosa
Molisch  + Ácido Sulfúrico


Conclusiones:

·         Reacción exotérmica – Libera energía.
Esta reacción sirve para el reconocimiento de todo tipo de azúcares. Los azúcares, en medio ácido fuerte se deshidratan formando furfurales. Estos furfurales al reaccionar con la α-naftol originan complejos de intenso color. Es una reacción general para todos los glúcidos.

La sacarosa, lactosa y glucosa que fueron los azúcares usados dieron un resultado positivo con el reactivo de Molish, a pesar de que la glucosa son monosacáridos y de que la sacarosa y la lactosa son disacáridos, esto hace que dicha clasificación se deba al tiempo que tarda en formarse el anillo color rojo violeta ya que el ácido sulfúrico concentrado [H2SO4] permite que los glúcidos se deshidraten formando compuestos furfúricos.

 CARACTERÍSTICAS DE LOS ÁCIDOS GRASOS


9.2 SOLUBILIDAD EN LÍPIDOS

TUBO
CANTIDAD
REACTIVO
PROCEDIMIENTO
1
Agua
Hexano

·         Se toma 3 ml de agua y 3 ml de aceite  en cada uno de los tubos.
·         Se adiciona 3 ml de hexano a cada tubo.

2
Aceite
Hexano

Conclusiones:
El n-hexano es un hidrocarburo que se obtiene del petróleo (por tanto, de una fuente no renovable). Su estructura consta de una cadena lineal de seis átomos de carbono y catorce de hidrógeno. Tiene un olor reconocible, ya que es similar al de la gasolina (que contiene también hexano, además de hidrocarburos de cadenas más largas).
El hexano es muy volátil e inmiscible con agua, por lo que, caso de verterse, no permanece mucho tiempo en al agua o el suelo, evaporándose rápidamente y degradándose en cuestión de días por reacción con el oxígeno del aire.
El hexano en su mezcla con los aceites deja entre un 6% y 14% de materia oleosa en el residuo, lo que genera una extracción y por destilación este deja el aceite puro, por lo que se deduce no se mezcla con el aceite.

9.3 REACCIÓN CON EL SUDÁN III
TUBO
CANTIDAD
REACTIVO
PROCEDIMIENTO
1
Aceite
Sudan III 
·         Se toma 3 ml de aceite vegetal.
·         Se adiciona 8 gotas de sudan III.

Conclusiones:
·         Reacciona positivo de color naranja.

La técnica del sudan III es un método utilizado fundamentalmente para demostrar la presencia mediante tinción de triglicéridos, aunque también tiñe otros lípidos, pertenece al grupo de colorantes indiferentes, que son aquellos que no tienen afinidad por estructuras básicas. Son insolubles en el agua y tiñen aquellas sustancias que tienen un poder de disolución superior al del líquido empleado para preparar la solución colorante.