INFORME
DE LABORATORIO
BIOQUÍMICA
Gloria Shirley Arenas
Código: 52383178
Gustavo Jaimes Monroy
UNIVERSIDAD NACIONAL
ABIERTA Y A DISTANCIA
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PRÁCTICA 1.
PROPIEDADES BIOQUÍMICAS DE LOS AMINOÁCIDOS
Aminoácido: Poseen un grupo
amino (-NH2), un grupo carboxilo (-COOH) y grupos R que es la que los
diferencia y aporta propiedades de soluble (polar o hidrofílico) o insoluble (apolar
o hidrofóbico) en agua.
REACCIÓN CON LA NINHIDRINA
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Tubos
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Solución
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Reactivo
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Procedimiento
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Observaciones Reacción
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1
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1.5 ml de Glicina1%
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Ninhidrina
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Se prepararon los tubos
de ensayo. Se
etiquetaron. Se agregó a
cada tubo de ensayo 1,5 ml de la solución correspondiente. Se adicionó a cada
tubo 2,5 ml de solución (0,3%) de ninhidrina, se adiciono 100 ml de agua
destilada al 10%. Luego
se llevaron los tubos de ensayo a un baño de agua hirviente por 10 minutos y
se colocan en la gradilla para observar su reacción.
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(+) Positivo violeta
azulado Porque su grupo amino es primario.
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1
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1,5 ml de Leche de Soya
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Ninhidrina
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Toma un color violeta claro,
pero se demora más en reaccionar al calor.
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REACCIÓN DE BIURET
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Tubos
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Solución
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Reactivo
|
Procedimiento
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Observaciones Reacción
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1
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1.5 ml de Glicina1%
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Hidróxido de sodio (NaOH)
+ Biuret
|
Se prepararon los tubos
de ensayo. Se
etiquetaron. Se agregó a
cada tubo de ensayo 1,5 ml de la solución correspondiente. Luego 2 ml de hidróxido de sodio,
también se
adicionó a cada tubo 3 gotas de biuret. Luego se agitaron y se colocaron
en la gradilla para observar su
reacción.
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(-)Negativo , no
reacciona
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1
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1,5 ml de Leche de Soya
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Hidróxido de sodio (NaOH)
+ Biuret
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(+) Positivo toma color
violeta azulado
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REACCIÓN DE MILLON
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Tubos
|
Solución
|
Reactivo
|
Procedimiento
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Observaciones Reacción
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1
|
1.5 ml de Glicina1%
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Reactivo de Millón +
Sulfato cúprico (CuSO4)
|
Se prepararon los tubos
de ensayo. Se
etiquetaron. Se agregó a
cada tubo de ensayo 1,5 ml de la solución correspondiente. Se adicionó a cada
tubo 15 gotas del reactivo de Millón y luego 3 gotas de solución de Sulfato
cúprico al 1%.
Luego se llevaron los tubos de ensayo a un baño de agua hirviente por
10 minutos y se colocan en la gradilla para observar su reacción.
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(+) Positivo amarillo
|
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1
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1,5 ml de Leche de Soya
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Reactivo de Millón +
Sulfato cúprico (CuSO4)
|
(+) Positivo amarillo
|
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Datos:
Preparación
de materiales y reactivos para el desarrollo de las prácticas:
Reacción con la ninhidrina: La ninhidrina
reacciona específicamente con el grupo de a-amino de los aminoácidos, ya sean
libres o bien unidos mediante enlaces peptídicos.
La
ninhidrina a pH entre 4 y 8 es un oxidante muy fuerte y siempre reacciona con
los grupos de a-amino libreando amonio, el cual se condensa con la ninhidrina
reducida y con otra molécula de ninhidrina formando un compuesto coloreado que
varía de azul a violeta púrpura.
Esta
reacción también se conoce como condensación de ninhidrina.
Reacción de Biuret:
Con
esta reacción se pueden ver la presencia de enlaces peptídicos, los cuales son
iones específicos entre los aminoácidos. Se basa en la formación de sales
complejas de color violeta al añadirle hidróxido de sodio en solución alcalina.
El complejo está formado por enlaces de coordinación, donde los pares
electrónicos proceden de los grupos aminos de los aminoácidos de cadena
polipéptica.
Reacción de Biuret
Reacción de Millón: Sirve
para caracterizar los aminoácidos con grupos fenólicos ( ). Si en la proteína hay
tirosina, da positivo (color carne). Este reactivo consiste en una solución de
nitrato de mercurio (II) en solución de ácido nítrico-nitroso.
Resultados
de las reacciones:
Conclusiones:
·
El reactivo biuret sólo
funciona para detectar la presencia de proteínas, mas no incluye aminoácidos,
puesto que el biuret reacciona con enlaces peptídicos formados por la unión de aminoácidos
propios de las proteínas.
·
La reacción con la
ninhidrina produce colores que sirven como base para la cuantificación de todos
los aminoácidos primarios.
·
El color obtenido con
la ninhidrina, es la base de la prueba colorimétrica que permite la
identificación y cuantificación de aminoácidos.
·
En la reacción de
millón además de la nitración del anillo fenólico, se incorpora a su estructura
el mercurio (Hg ++) produciéndose un derivado mercúrico de nitrotirosina de
color rojo.
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PRÁCTICA 2.
PROPIEDADES BIOQUÍMICAS DE LAS PROTEÍNAS
Proteínas: Las proteínas uno
de los principales componentes celulares, son las que trabajan en el cuerpo
humano a nivel celular, están formadas por aminoácidos.
Registros:
Gracias a la
reacción de Biuret se reconoce la presencia de proteína.
REACCIÓN DE BIURET
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Tubos
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Solución
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Reactivo
|
Procedimiento
|
Observaciones Reacción
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1
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Albumina
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Hidróxido de Sodio (NaOH)
+ Biuret
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Se preparó el tubo de ensayo, se etiqueto, se agregó 3 ml
de Albumina + 2 ml de hidróxido de Sodio + 4 gotas de Biuret. Luego se agito y se colocó en la
gradilla para observar su reacción.
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(+) Positivo azul Porque tiene enlaces pépticos en un medio
alcalino.
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REACCIÓN DE AMINOÁCIDOS
AZUFRADOS
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||||
Tubos
|
Solución
|
Reactivo
|
Procedimiento
|
Observaciones Reacción
|
1
|
Albumina
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Hidróxido de Sodio (NaOH)
+ Acetato de Plomo
|
Se preparó el tubo de
ensayo. Se etiqueto. Se agregó 2ml de la solución de hidróxido sódico al
20%. Se adicionó 10 gotas
de solución de acetato de plomo al 5%.
Luego se llevó el tubo de ensayo a un baño de agua hirviente
por 10 minutos y se coloca en la gradilla para observar su reacción.
|
(+) Positivo negruzco. El
precipitado negruzco indica que se ha formado sulfuro de Plomo, con el azufre
de los aminoácidos.
|
Datos:
Por
la estructura peptídica y la presencia de determinados grupos (grupos R), las
proteínas pueden reaccionar con una variedad de agentes originándose productos
coloreados. Estas reacciones son la base para la determinación cuantitativa y
cualitativa de las proteínas. Por presentarse variaciones en la composición de
los aminoácidos de las diferentes proteínas, se manifiestan diferentes colores
y grados de intensidad para una misma reacción, íntimamente relacionado con la
naturaleza de la proteína analizada.
Reacción de Biuret:
Las
proteínas por sus uniones peptídicas reaccionan con los iones cúpricos del
reactivo en medio alcalino formando un complejo de color violeta. Se necesitan
2 o más uniones peptídicas para que se forme el complejo coloreado. Esta prueba
sirve para la identificación de tripéptidos en adelante. Un color violeta
resulta cuando los iones cúpricos en medio alcalino se completan con los
electrones no saturados de los átomos de nitrógeno y oxígeno de los
enlaces de todas las proteínas. La cantidad de color producido
es proporcional a la concentración de proteínas.
Reacción de Aminoácidos Azufrados:
Se
manifiesta por la formación de un precipitado negruzco de sulfuro de plomo. Se
basa esta reacción en la separación mediante un álcali, del azufre de los
aminoácidos, el cual al reaccionar con una solución de acetato de plomo, forma
el sulfuro de plomo.
Son
compuestos que presentan azufre como es el caso de la metionina
y dela cisteína los dos aminoácidos azufrados son esenciales, la metionina
estrictamente, mientras que la cisteína puede formarse a partir de la
metioniona (no al revés). Las dietas basadas en leguminosas
pueden ser deficientes en estos aminoácidos. Además, ambos
son bastante inestables frente a condiciones de oxidación. La
cisteína es muy importante en el mantenimiento de la estructura
terciaria y cuaternaria de la mayoría de las proteínas mediante la formación de
puentes de sulfuro, en dímeros de la cisteína formados poroxidación.
Resultado
reacción de Aminoácidos Azufrados:
Conclusiones:
·
Luego
de realizada la reacción de Biuret la muestra se tornó azul -violeta, por
lo que podemos decir que existen enlaces pepiticos y por lo tanto
proteínas en la muestra y dicha proteína es la caseína.
·
Las
proteínas constituyen una de las moléculas más importantes en el organismo, ya
que cumple muchas funciones.
·
Para
aminoácidos azufrados utilizamos un medio alcalino y junto con sales de plomo
se formó un precipitado de color negro.
·
Un aporte
adecuado de azufre a través de aminoácidos azufrados es esencial para el buen
mantenimiento de la piel, el cabello, así como los ligamentos y los tendones.
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PRÁCTICA 3.
IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS
Los carbohidratos: Son
biomoléculas de aldehídos o cetonas polisacáridos.
Registros:
PRUEBA DE BENEDICT
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Tubos
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Solución
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Reactivo
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Procedimiento
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Observaciones Reacción
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1
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3 ml de Glucosa
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Benedict
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Se prepararon los tubos
de ensayo. Se
etiquetaron. Se agregó a cada tubo de ensayo 3ml de la solución
correspondiente. Se
adicionó a cada tubo 2 ml de reactivo Benedict. Luego se llevaron los tubos
de ensayo a un baño de agua hirviente por 10 minutos, se agito cada tubo y se
colocan en la gradilla para observar su reacción.
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(+) Positivo Naranja-Café
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1
|
3 ml de Lactosa
|
Benedict
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(+) Positivo Naranja-Café
|
|
1
|
3 ml de Sacarosa
|
Benedict
|
(+) Positivo Azul
|
|
REACCIÓN DE FEHLING
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||||
Tubos
|
Solución
|
Reactivo
|
Procedimiento
|
Observaciones Reacción
|
2
|
3 ml de Glucosa
|
Fehling A Fehling B
|
Se prepararon los tubos
de ensayo. Se
etiquetaron. Se agregó a
cada tubo de ensayo 3 ml de la solución correspondiente. Se adicionó a cada
tubo 1 ml del reactivo Fehling A y 1 ml del reactivo Fehling B. Luego se llevaron los tubos de ensayo
a un baño de agua hirviente por 10 minutos y se colocan en la gradilla para
observar su reacción.
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Reacción (+)
Positiva
Naranja oscuro
|
2
|
3 ml de Lactosa
|
Fehling A Fehling B
|
Reacción positiva
(+)
Naranja oscuro
|
|
2
|
3 ml de Sacarosa
|
Fehling A Fehling B
|
(+) Positivo Color
Azul
|
|
REACCIÓN DE MOLISCH
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||||
Tubos
|
Solución
|
Reactivo
|
Procedimiento
|
Observaciones Reacción
|
1
|
3 ml de Glucosa
|
Molisch + H2SO4
|
Se prepararon los tubos
de ensayo. Se
etiquetaron. Se agregó a
cada tubo de ensayo 3 ml de la solución correspondiente. Se adicionó a cada
tubo 1 ml del reactivo Molisch, se mezcló bien, se inclinó cada tubo y se le
agrego 1ml de H2SO4 concentrado deslizándolo lentamente por la pared del
tubo. Se mezcló
bien y se colocan en posición vertical
en la gradilla para observar su reacción.
|
Se calienta
inmediatamente.
|
1
|
3 ml de Lactosa
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Molisch + H2SO4
|
Se calienta
inmediatamente.
|
|
1
|
3 ml de Sacarosa
|
Molisch + H2SO4
|
Se calienta
inmediatamente.
|
|
1
|
Ácido Sulfúrico
|
Molisch + H2SO4
|
(+) Positivo Anillo
violeta. Se calienta inmediatamente.
|
|
Datos:
Los carbohidratos son moléculas
formadas por carbono, hidrógeno y oxígeno (C, H, O) e incluyen algunas de las
moléculas más relevantes en la vida de los organismos, como son la glucosa.
La Prueba de Benedict:
Se utiliza para
detectar azúcares reductoras (glucosa, fructosa y algunos disacáridos), se llaman
así porque tienen grupos aldehídos libres. El reactivo de Benedict tiene cobre
(Cu), el cual se reduce en presencia de estos azúcares reductores, el azúcar se
oxidará, ganando un oxígeno, y el cobre del reactivo de Benedict se reducirá,
perdiendo un oxígeno.
.
Cuando se agrega
el reactivo de Benedict al azúcar
reductor y se aplica calor, el color de la mezcal queda (semi- cuantitativa).
Glucosa+ 2ml Benedict:
En un principio la mezcla se quedó de color azul claro, pero cuando empezamos a
calentar la mezcla, esta obtuvo un color amarillo y cada vez más oscuro hasta
quedar de color naranja
Reacción de Fehling:
Su acción
se fundamenta en el poder reductor del grupo carbonilo de los aldehídos el cual
se oxida a ácido y se reduce la sal de cobre en medio alcalino a óxido de
cobre, formando un precipitado de color rojo.
El
reactivo de Fehling se fundamenta principalmente, en su reacción, la oxidación
de cobre, el poder reductor de los azúcares, sea este en monosacáridos,
polisacáridos, aldehídos, y en ciertas cetonas.
Se dio en
la glucosa lactosa este reactivo, reacciona principalmente con los
aldehídos porque tienen un grupo carbonilo más expuesto, que le da el carácter
reductor, y existe la presencia del precipitado rojo ladrillo (óxido cuproso).
Reacción de Molish:
Es un método cualitativo la cual se
utiliza para poder observar la presencia de carbohidratos en una muestra
desconocida y a su vez poder determinar si en la muestra se forma de manera
inmediata el precipitado con el óxido cúprico (Cu2O) tendríamos un
monosacárido y si se tarda un tiempo más prolongado en formar el precipitado se
trataría de un disacárido.
.
Conclusiones:
·
Reacción de Benetict positiva
alta concentración de azúcar.
·
La prueba de Fehling nos permite identificar cual
es un azúcar reductor.
·
La mayoría
de los monosacáridos y algunos disacáridos poseen poder reductor.
·
Un azúcar es
reductor por la formación de un precipitado de color rojo ladrillo (óxido
cuproso) y la decoloración de la solución.
·
La sacarosa
es un azúcar no reductor, debido a que
no se formó un precipitado de color rojo ladrillo.
·
La
reacción de Molish identifica a los carbohidratos y los diferencia de
otras moléculas orgánicas
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PRÁCTICA
4.
ÁCIDOS GRASOS
Registros:
Lípidos: Son sustancias
hidrofólicas con 1 grupo carboxilo.
SUDAN III
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||||
Tubos
|
Solución
|
Reactivo
|
Procedimiento
|
Observaciones Reacción
|
1
|
Aceite vegetal
|
Sudan III
|
Se prepararon los tubos
de ensayo. Se
etiquetaron. Se agregó
a cada tubo de ensayo 3 ml de la solución correspondiente. Se adicionó a cada
tubo 8 gotas de Sudan III y
se colocan en la gradilla para observar su reacción.
|
(+) Positivo Anillo rojo
|
HEXANO
|
||||
Tubos
|
Solución
|
Reactivo
|
Procedimiento
|
Observaciones Reacción
|
1
|
Aceite
|
Hexano
|
Se prepararon los tubos
de ensayo. Se
etiquetaron. Se agregó a
cada tubo de ensayo 3 ml de la solución correspondiente. Se adicionó a cada
tubo 4 ml de Hexano, se agito y se colocan en la gradilla para observar su
reacción.
|
Hay solubridad.
|
2
|
Agua destilada
|
Hexano
|
Hay solubridad.
|
|
Datos:
Hexano+
Aceite
Sudan III
Aceite
vegetal+ Sudan III:
Este reactivo es utilizado fundamentalmente para
detectar, la presencia de lípidos en una muestra los cuales se colorean con
dicho reactivo, se debe a que este reactivo por su baja polaridad es más
soluble en los lípidos que en el solvente Los lípidos son insolubles en agua,
se debe que la estructura química básica de los lípidos consiste en cadenas
hidrocarbonadas con muchos enlaces C-C y-CH. Estos enlaces no poseen polaridad
y no existen interacción con las moléculas de agua.
Conclusiones:
·
La
saponificación es una de sus principales propiedades, las grasas se descomponen
al reaccionar, con el hidróxido sódico y potásico descomponiéndose en los
elementos que la forman.
·
Hexano + Aceite: el aceite y el hexano son compuestos no polares por lo tanto
del mismo signo por esa razón observamos que se pueden disolver.
·
Hexano +Agua: No
se mezclan
CONCLUSIONES
Ø Para
concluir, con el desarrollo de estas prácticas identificamos los recursos
utilizados en el laboratorio (equipos, insumos, reactivos).
Ø Así
mismo, reconocimos las diversas reacciones químicas a través de las prácticas
realizadas.
Ø Por
lo tanto, comprendimos el concepto de biomoléculas sus características y
las funciones específicas que adquieren por la variedad de grupos
funcionales que poseen.
Ø Finalmente,
se reconocieron las propiedades bioquímicas de los aminoácidos y de las
proteínas, al igual que se identificaron carbohidratos y ácidos grasos.
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REFERENCIAS
García Jerez A. Guia
de práctica de laboratorio Bioquímica. Universidad Nacional Abierta y a
Distancia.
Recuperado el 1
de septiembre de 2016 de: http://datateca.unad.edu.co/contenidos/151030/2016-II-_BIOQUIMICA_151030/GUIA_DE_LABORATORIO_2015.pdf
Damodaran,
S. (2000). Aminoácidos, péptidos y proteínas. Química
de alimentos, 2, 490.
Recuperado del 02 de octubre de 2016 de: http://datateca.unad.edu.co/contenidos/202015/AVA_2015/ProteinasI_7448.pdf
Macarulla, J. M., & Goñi, F. M. (1993). Biomoléculas: lecciones de
bioquímica estructural. Reverté.
Recuperado del 07 de octubre de 2016 de: https://books.google.es/books?hl=es&lr=&id=WUzrV3z3NogC&oi=fnd&pg=PA1&dq=Biomoleculas&ots=tHwnPKEZyy&sig=X88uTcdO5VUJr3f8ylk0C175jR0#v=onepage&q=Biomoleculas&f=false
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