Laboratorio Presencial

Laboratorio Bioquímica

Estudiantes:

Jessica Acevedo

Julieth Ayala

Jessica Roció Espinoza Duque

Sandra Milena Triviño

PROPIEDADES BIOQUÍMICAS DE LOS AMINOÁCIDOS

6.2 REACCIÓN CON LA NINHIDRINA

TUBO	CANTIDAD	REACTIVO	PROCEDIMIENTO
1	Glicina	Ninhidrina	·         Se toma 1.5 ml de cada mezcla ·         Se adiciono 2.5 ml de ninhidrina a cada mezcla. ·         Se colocaron los tubos en baño María por 10 minutos.
2	Leche de Soya	ninhidrina

Conclusiones:

Reacción: endotérmica

La reacción de Ninhidrina, (hidrato de tricehidrindeno) un agente oxidante poderoso, se presenta cambios en cuanto a la reacción con los aminoácidos, como son a un PH 4 - 8, donde este compuesto puede llegar  a dar calor purpura en la muestra de laboratorio obtenida. Dicha reacción se verifica con las llamadas aminas primarias y la participación del amoniaco donde no se evidencia el desprendimiento del CO2. Este cambio positivo es muy sensitivo y es una muestra apropiada para revisar  la  detección de los aminoácidos, por nombrar algunos, los aminoácidos que contienen el núcleo aromático, su reacción es de color amarillo, cuando se presenta alta temperatura con el ácido nítrico, allí las sales de estos se tornan de color naranja

Porque el cambio de color la muestra de Glicina?

El grupo alfa – amino de los aminoácidos constituyen complejos coloreados con la Ninhidrina: Un color violeta lo cual presentan el caso de los aminoácidos en su grupo primario.

Porque la soya se demoró más?

El tiempo en identificar los aminoácidos es un proceso más lento, pero es una muestra positiva para aminoácidos y las proteínas que hagan parte del grupo como se conoce el NH2 – libre entre otros que pueden llegar a generar estos cambios.

 6.3 REACCIÓN DE BIURET

TUBO	CANTIDAD	REACTIVO	PROCEDIMIENTO
1	Glicina	Hidróxido de sodio  +  Biuret	·         Se toma 1.5 ml de cada mezcla ·         Se adiciono hidróxido de Sodio 1 ml. ·         Se adiciona 3 gotas de Biuret a cada tubo.
2	Leche de Soya	hidróxido de sodio  +  Biuret

Conclusiones:

Las muestras se muestran de forma positiva, ya que se evidencia presencia de proteínas, en el momento que se torna color violeta es por la participación anteriormente dicha, y en cuanto al color rosa este realiza reacción por las cadenas de los poli péptidos no tan largos en sus enlaces. Las proteínas en forma coagulada se pueden llegar a reaccionar con la sustancia del Biuret, este reactivo es aquel que detecta las presencias de proteínas, péptidos menores y entre otros enlaces peptídicos sobre una núcleo que cuya estructura es desconocida. En cuanto al color violeta de la muestra, allí se observa las proteínas como se pueden llegar a nombrar la grenetina, entre otros esta es una reacción de manera positiva.

Se evidencia reacción del Biuret sobre un aminoácido como lo es la Glicina?

En una observación que se le realiza a un aminoácido, la reacción debería en ese momento es negativa, pero teniendo en cuenta que no presentan las conexiones de los péptidos, con la intervención de un solo aminoácido, esta construcción de los aminoácidos son dobles por cada muestra combinada.

6.5 REACCION DE MILLON

TUBO	CANTIDAD	REACTIVO	PROCEDIMIENTO
1	Glicina	Millon  + Sulfato Cúprico	·         Se toma 1.5 ml de cada mezcla ·         Se adiciona 15 gotas de Reactivo Millon. ·         Se adiciona 3 gotas de sulfato cúprico 1% a cada tubo. ·         Se colocan los tubos a baño María por 10 minutos.
2	Leche de Soya	Millon   +  Sulfato Cúprico

Conclusiones:

·         Reacción: Endotérmica

·  Las proteínas están constituidas por aminoácidos, por los cuales los métodos se basan en el reconocimiento de los aminoácidos.

·         La Glicina no reacciono ya que no contiene moléculas de proteínas

·         En la leche de Soya se obtuve reacción ya que esta posee proteínas.

 BIOQUÍMICAS DE LAS PROTEÍNAS

7.2 REACCIÓN DE BIURET

TUBO	CANTIDAD	REACTIVO	PROCEDIMIENTO
1	Albumina	hidróxido de sodio  +  Biuret	·         Se toma 3 ml de la mezcla de albumina. ·         Se adiciona 4 gotas de hidróxido de Sodio. ·         Se adiciono 4 gotas de Biuret.

Conclusiones:

Permite determinar la presencia de enlaces peptídicos en una muestra debido a la formación de un compuesto de coordinación de color violeta.El método de Biuret  en la determinación de proteínas procede del compuesto coloreado formado por la condensación de dos moléculas de urea con eliminación de amoniaco. En este caso el Sulfato Cúprico (CuSO4) se añade a una solución de proteína que forma un complejo entre el ion cúprico y los enlaces peptídicos con la aparición de una  coloración violeta-purpura, lo que se debe a que el cobre tiene la propiedad formar dichos iones. El color violeta resulta cuando los iones cúpricos en medio alcalino se compleja con los electrones no saturados de los átomos de nitrógeno y oxigeno de los enlaces de todas las proteínas. La cantidad de color ese proporcional a la concentración de proteínas y es medida espectrofotométricamente a 550mm (Wharton 1972).

7.3 REACCIÓN DE AMINOÁCIDOS AZUFRADOS

TUBO	CANTIDAD	REACTIVO	PROCEDIMIENTO
1	Albumina	Hidróxido de Sodio  +  Acetato de Plomo	·         Se toma 3 ml de la mezcla de albumina. ·         Se adiciona 20 % de hidróxido de sodio. ·         Se adiciona 10 gotas de Acetato de Plomo. ·         Se coloca en baño María por 10 minutos.

Conclusiones:

Reacción: endotérmica 

Se forma un precipitado de color negruzco lo que nos indica que se ha formado sulfuro de plomo, utilizándose el azufre de los aminoácidos, lo que nos sirve para identificar proteínas que tienen en su composición aminoácidos con azufre.

De esta manera se pudo comprobar que la albúmina contiene aminoácidos azufrados (cisteína o metionina). 

IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS

8.2 PRUEBA DE BENEDICT

TUBO	CANTIDAD	REACTIVO	PROCEDIMIENTO
1	Glucosa	Benedict	·         Se toma 3 ml de cada mezcla. ·         Se adiciona 2 ml de Benedict a cada tubo. Se colocan a baño María por 10 minutos
2	Lactosa	Benedict
3	Sacarosa	Benedict

Conclusiones:

Reacción: Endotérmica

La solución de Benedict es un líquido de color azul claro en su estado puro, pero cuando se agrega a la glucosa y se calienta, se vuelve marrón anaranjado. La solución de Benedict también puede detectar la presencia de otros azúcares de estructura similar. El uso más común de la solución de Benedict es en la detección de glucosa en la orina para diagnósticos de diabetes. Los diabéticos excretan glucosa en su orina porque sus células son incapaces de absorberla apropiadamente. Luego de un diagnóstico positivo, son necesarias pruebas adicionales para medir la cantidad de glucosa excretada.Esta reacción identifica azucares reductores (aquellos que tienen su OH anomerico libre), como la lactosa, la glucosa, la maltosa y celobiosa. En soluciones alcalinas, puede reducir la composición  Cu2+ que tiene color azul a Cu+ que precipita la solución alcalina como Cu2O de color rojo-naranja.  El fundamento de esta reacción radica en que en un medio alcalino, el ion cúprico es capaz de reducirse por efecto del grupo. Por lo tanto este nuevo ion  se observa como un precipitado rojo ladrillo correspondiente al oxido cuproso.

8.3 REACCIÓN DE FEHLING

TUBO	CANTIDAD	REACTIVO	PROCEDIMIENTO
1	Glucosa	Fehling A Fehling B	·         Se toma 3 ml de cada mezcla. ·         Se adiciona 1 ml de fehling A. ·         Se adiciona 1 ml de fehling B. ·         Se colocan a baño maría por 10 minutos.
2	Lactosa	Fehling A Fehling B
3	Sacarosa	Fehling A Fehling B

Conclusiones:

Reacción: Endotérmica

El reactivo de Fehling, es una solución descubierta por el químico alemán Hermann von Fehling y que se utiliza como reactivo para la determinación de azucares reductores. Este reactivo está formado por dos soluciones llamadas A y B. La primera es una solución de sulfato cúprico; la segunda el hidróxido de sodio y potasio (sal de seignette). Cuando se mezclan cantidades iguales de ambas soluciones, aparece un color azul intenso por la formación de un complejo formado entre el ion cúprico y el tartrato. Agregando un aldehído y calentando suavemente, el color azul desaparece y aparece un precipitado rojo oxido cuproso. 

8.4 REACCIÓN DE MOLISCH

TUBO	CANTIDAD	REACTIVO	PROCEDIMIENTO
1	Glucosa	Molisch  + Ácido Sulfúrico	·         Se toma 3 ml de cada mezcla. ·         Se adiciona 2 gotas de Molisch en cada tuvo. ·         Se adiciona 1 ml de Ácido sulfúrico en cada tuvo.
2	Lactosa	Molisch  + Ácido Sulfúrico
3	Sacarosa	Molisch  + Ácido Sulfúrico

Conclusiones:

·         Reacción exotérmica – Libera energía.

Esta reacción sirve para el reconocimiento de todo tipo de azúcares. Los azúcares, en medio ácido fuerte se deshidratan formando furfurales. Estos furfurales al reaccionar con la α-naftol originan complejos de intenso color. Es una reacción general para todos los glúcidos.

La sacarosa, lactosa y glucosa que fueron los azúcares usados dieron un resultado positivo con el reactivo de Molish, a pesar de que la glucosa son monosacáridos y de que la sacarosa y la lactosa son disacáridos, esto hace que dicha clasificación se deba al tiempo que tarda en formarse el anillo color rojo violeta ya que el ácido sulfúrico concentrado [H2SO4] permite que los glúcidos se deshidraten formando compuestos furfúricos.

 CARACTERÍSTICAS DE LOS ÁCIDOS GRASOS

9.2 SOLUBILIDAD EN LÍPIDOS

TUBO	CANTIDAD	REACTIVO	PROCEDIMIENTO
1	Agua	Hexano	·         Se toma 3 ml de agua y 3 ml de aceite  en cada uno de los tubos. ·         Se adiciona 3 ml de hexano a cada tubo.
2	Aceite	Hexano

Conclusiones:

El n-hexano es un hidrocarburo que se obtiene del petróleo (por tanto, de una fuente no renovable). Su estructura consta de una cadena lineal de seis átomos de carbono y catorce de hidrógeno. Tiene un olor reconocible, ya que es similar al de la gasolina (que contiene también hexano, además de hidrocarburos de cadenas más largas).

El hexano es muy volátil e inmiscible con agua, por lo que, caso de verterse, no permanece mucho tiempo en al agua o el suelo, evaporándose rápidamente y degradándose en cuestión de días por reacción con el oxígeno del aire.

El hexano en su mezcla con los aceites deja entre un 6% y 14% de materia oleosa en el residuo, lo que genera una extracción y por destilación este deja el aceite puro, por lo que se deduce no se mezcla con el aceite.

9.3 REACCIÓN CON EL SUDÁN III

TUBO	CANTIDAD	REACTIVO	PROCEDIMIENTO
1	Aceite	Sudan III	·         Se toma 3 ml de aceite vegetal. ·         Se adiciona 8 gotas de sudan III.

Conclusiones:

·         Reacciona positivo de color naranja.

La técnica del sudan III es un método utilizado fundamentalmente para demostrar la presencia mediante tinción de triglicéridos, aunque también tiñe otros lípidos, pertenece al grupo de colorantes indiferentes, que son aquellos que no tienen afinidad por estructuras básicas. Son insolubles en el agua y tiñen aquellas sustancias que tienen un poder de disolución superior al del líquido empleado para preparar la solución colorante.